Blood Genomic DNA Midi Kit

中量血液基因组 DNA 提qu试剂盒

（溶液型）

中量全血基因组DNAti取试剂盒 核酸提取

目录号:40013

产品内容：

自备试剂：

异丙chun、70％乙chun

保存条件：

室温（15~25℃）

蛋白mei K，室温可保存 6 个月，4℃保存 12 个月，~ 20℃保存 2 年。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准 

产品简介：

适用于从新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液样本中快速提取高质量的基因组DNA，也可以提取白膜层和血凝块。

首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙chun沉淀并重溶解于DNA溶解液。

产品特点：

1.    简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。

2.    安全无毒：无需苯fen/lv仿抽提。

3.    高产：典型的产量 3 ml 全血可提取出 50～150µg 基因组 DNA。

4.    高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 50～150 kb，可直接进行可直接用于构建文库、PCR、、mei切、Southern-blot 等分子生物学实验。

注意事项：

1.    本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如 EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。

2.    为了最jia效果，最hao使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。

3.    不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，血液DNA产量的个体差异也可能非常大。

4.    如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

5.    本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。

6.    DNA溶解液是TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），长期保存DNA，但是EDTA可能下游mei切反应，使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。

操作步骤：

使用前，请先用去离子水将 10x 红细胞裂解液稀释 10 倍到 1x。

1.     吸取 15 ml 1x 红细胞裂解液到一个 15 ml 离心管。

2.     将抗凝全血（使用前恢复至室温）颠倒混匀后，吸取 3 ml 加到上一步装

有红细胞裂解液的离心管中，颠倒 6-8 次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。

3.     室温放置 10 min（期间应该颠倒轻弹，混匀数次帮助裂解红细胞）。

4.     2,500 xg 离心 2 min，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清，留下完整的管底白细胞团和大约 50 μl 的残留上清。

注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入适量红细胞裂解液重悬细胞团后，重复步骤 3，4。

5.     涡旋振荡直到白细胞团充分重悬、分散。

注意：白细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，白细胞未打散就加入细胞核裂解液，会导致白细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块。

6.     加入 3 ml 细胞核裂解液到重悬的白细胞，上下吹打裂解白细胞，或者剧烈涡旋 10 sec 帮助裂解白细胞。

7.     (可选步骤，一般不需要) 在裂解物中加入 RNase A（10 mg/ml）至终浓度 30 μg/ml，颠倒 25 次混匀，37℃温育 15 min 去除残留 RNA，然后冷却回室温。

8.     加入 1 ml 蛋白沉淀液后，涡旋振荡 25 sec, 充分混匀，可能见到一些小的蛋白团块。

9.     2,500 xg 离心 5 min。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也

可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

10.  小心吸取上清（大约 3 ml）到一个新的 1.5 ml 离心管中。

注意：吸取上清时，注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心 2 min 后取上清。

11.  加入等体积的室温异丙chun（3 ml），轻柔颠倒 30 次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色 DNA 沉淀。

12.  2,000 xg 离心 3 min，在管底可以见到白色 DNA 沉淀块，倒弃上清。

13.  加入 3ml 70％乙chun，颠倒几次漂洗 DNA 沉淀，2,000 xg 离心 1 min，倒去上清（注意不要把 DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙chun，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙chun，空气晾干沉淀几分钟。

注意：不要干燥过头，否则 DNA 极其难溶；也不能残留太多乙chun，否则乙chun可能抑制下游如mei切反应。

14.  加入 250 μl DNA 溶解液重新溶解 DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在 65℃温育 30-60 min（不要超过一小时），期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA。

15.  DNA 可以存放在 2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

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