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糖化酶(Glucoamylase)试剂盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
糖化酶，即葡萄糖淀fen酶（EC3.2.1.3），又称γ-淀fen酶，是一种外切型糖苷酶，它从淀粉的非还原性末端水解α-1,4 糖苷键和α-1,6 糖苷键，将淀粉wan全水解为葡萄糖，因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸，甘油，淀粉糖等工业中，是我国重要的工业酶制剂之一。
糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物，在 540nm 处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比，可测定计算得糖化酶的活力。
产品名称 | BI6056-50T/24S | Storage |
提取液：液体 | 50ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 25ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 25ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 | |
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
对照管 | 测定管 | |
样本（μl） | 50 |
灭活样本（μl） | 50 | |||
试剂一（μl） | 500 | 500 | ||
充分混匀，40℃反应 20min | ||||
试剂二（μl） | 450 | 450 | ||
混匀，沸水浴 5min，自来水冷却后，于 1ml 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测 定 540nm 处吸光值A，△A=A 测定管-A 对照管 | ||||
酶活性计算公式：
标准曲线：y = 0.2164x - 0.0182，R2 = 0.9992
1. 按照蛋白含量计算
酶活性定义：在 40℃，pH4.6 条件下，每毫克蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
酶活性定义：在 40℃，pH4.6 条件下，每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性（U/g 鲜重）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ W
3. 按照液体体积计算
酶活性定义：在 40℃，pH4.6 条件下，每毫升培养液每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反总÷V 样÷T
= 2.54×（△A+0.0182）
4. 按照细胞数量计算
酶活性定义：在 40℃，pH4.6 条件下，每 104 个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1mg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性（U/104cell）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反总÷（V 样×细胞数量（万个）÷V 样总）÷T
= 2.54×（△A+0.0182）÷ 细胞数量（万个）
V 反总：反应总体积，0.55ml，V 样：反应体系中加入样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
1. 灭活样本的制备建议将样本放在沸水浴中煮沸 10min，以将酶彻di灭活。
2. 测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
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