β-木糖苷酶（β- xylosidase）测定试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

测定原理：

β-木糖苷酶催化对硝基ben酚-β-D-木糖苷产生对硝基ben酚，对硝基ben酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

β-木糖苷酶测定试剂盒 糖代谢系列

组成：

自备仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿和蒸馏水。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作表：

β-木糖苷酶活性计算公式：

标准曲线：y=13.226x+0.0011，R²=0.9998；x 为标准品浓度（μmol/ml），y 为吸光值ΔA。

1、按蛋白浓度计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基ben酚为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000

= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按样本质量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基ben酚为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按细胞数量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时每 10⁴ 个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基ben酚为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/10⁴cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）

÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基ben酚为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样÷T×1000

=11.34×(ΔA-0.0011)

V 样总：加入提取液体积，1ml； V 反总：反应总体积，0.6ml；V 样：反应中样品体积，0.2ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1μmol/ml=1000nmol/ml

ΔA 控制在 0.01-2 范围内，若ΔA 大于 2，可适当减小样本量。标准曲线线性范围为：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。

β-木糖苷酶测定试剂盒 糖代谢系列