N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶，广泛存在于各种组织、体液和细胞中，以前列腺和肾近曲小管细胞内含量最高。NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

NAG 分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基ben酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG 活性。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶试剂盒  糖代谢系列

组成：

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 5ml 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

迅速混匀，放入 37℃准确水浴 30min

充分混匀，400nm 处测定吸光值A，计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

NAG 活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00543x +0.0083；x 为标准品浓度（nmol/ml），y 为吸光值。

2、血清（浆）NAG 活力的计算

单位的定义：每ml 血清（浆）每分钟产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

NAG 活力(nmol /min/ml)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T =61.39×(ΔA-0.0083)

3、细胞、细菌和组织中 NAG 活力的计算

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

NAG 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=61.39×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.123×(ΔA-0.0083)

V 反总：反应体系总体积，0.5ml；V 样：加入反应体系中样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积， 1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间， 30min。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶试剂盒  糖代谢系列