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α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶 糖代谢系列
简要描述:

α-L-Af 是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶 糖代谢系列

  • 产品型号:BI6028
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2025-04-11
  • 访  问  量:79
详情介绍


α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af

分光光度法 50 /24 

 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

α-L-Af 是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。

测定原理:

α-L-Af 分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基ben酚,后者在 400nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-L-Af 活性。

α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶  糖代谢系列

组成:

产品名称

BI6034-50T/24S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:粉剂

1

-20℃

试剂二:液体

15ml

4℃

试剂三:液体

50ml

4℃

说明书

一份

试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5ml 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。


具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准


自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(ml) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。

2、样本测定( EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μl)

测定管

对照管

试剂一

200


蒸馏水


200

试剂二

250

250

样本

50

50

迅速混匀,放入 37℃准确水浴 30min

试剂三

1000

1000

充分混匀,400nm 处测定吸光值A,计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

α-L-Af 活性计算:

标准条件下测定的回归方程为y =0.00585x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/ml),y 为吸光值。

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg 组织蛋白每min 产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基ben酚定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.08×(ΔA +0.0027)

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;V 反总:反应体系总体积,0.5ml;V 样:加入反应体系中样本体积,0.05ml;

V 样总:加入提取液体积,1ml;W:样本质量,g 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。

α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶  糖代谢系列


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