葡萄糖脱氢酶（Glucose dehydrogenase，GCDH）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等动物的肝脏和弱氧化醋杆菌中。在低聚果糖生产中使用GCDH，不仅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸与钙离子结合生成的葡萄糖酸gai是一种理想的补钙制剂。因而，GCDH已成为制备高含量低聚果糖的理想用酶。

测定原理：

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD 生成D-葡萄糖酸和NADH，在 340nm 下测定NADH 上升速率，即可反映GCDH 活性。

葡萄糖脱氢酶试剂盒   糖代谢系列-常备现货

组成：

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：

组织的前处理：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

细菌或培养细胞的前处理：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；

2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、将工作液置于 37℃预热 5 分钟。

4、在 1ml 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 工作液，立即混匀，记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 1min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

GCDH 活性计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟生成 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GCDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

单位定义：每g 组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GCDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=3215×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

GCDH（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=6.43×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.05 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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