内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。
内质网膜蛋白提取试剂盒 常备现货

诺博莱德 内质网膜蛋白提取试剂盒

内质网膜蛋白提取试剂盒 常备现货

产品货号：P4998

产品名称：内质网膜蛋白提取试剂盒

产品规格：50T/100T

产品简介：

中文名称：内质网膜蛋白提取试剂盒

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder P4998 内质网膜蛋白提取试剂盒

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。内质网膜蛋白提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网膜蛋白的提取。本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

适用样本：动物细胞/组织

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另一方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。

本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于 2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的蛋白提取试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、匀浆器、涡旋混匀器、Dounce匀浆器、移液器、冰箱、冰盒，PBS缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

产品特点：

1、使用方便便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得优良实验效果

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，也可用普通玻璃匀浆器匀浆，但是内质网蛋白回收率会下降。

7. 要求离心力30000g-50000g的离心，最好能达到45000g左右。最小离心力需要保证30000g。若实验室离心机较小达不到30000g的离心力，或者离心管质量不能承受30000g的离心力，请使用能达到的最大离心力。此时内质网得率会相对较低。

8. 如果需要回收所有光面内质网小泡的蛋白，50000g离心步骤的离心力需要提高到100000g。

9. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

10. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

二、细胞内质网膜蛋白提取：

1. 提取液制备：

每 200μl 冷的蛋白提取液 C 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

每 200μl 冷的蛋白提取液 D 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】:

1)根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

2)加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3)以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 取 1-2×10

7个细胞，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

3. 用冷 PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 加入 500μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

5. 用 Dounce 匀浆器匀浆充分匀浆，然后在 4℃，1000×g 条件下离心 5 分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

7. 在 4℃，11000×g 条件下离心 10 分钟，将上清吸入另一预冷的干净离心管。

8. 在 4℃，30000×g -50000×g 条件下离心 45 分钟。

9. 在沉淀中加入 400μl 冷的试剂 B，混匀。

10. 在 4℃，30000×g -50000×g 条件下离心 45 分钟。

11. 弃上清，沉淀中加入 100-200μl 冷的蛋白提取液 C，混匀。

【注】:

1)提取液 C 使用前必须保持在 2-8℃条件。

12.在 4℃条件下振荡 30-40 分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。

【注】:

1)此步骤必须在 2-8℃处理。

2)用振荡器/摇床的较低转速，保持液体晃动即可。

3)没有 2-8℃振荡条件也可以不振荡，置 2-8℃静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

13. 在 4℃，12000×g 条件下离心 5 分钟。弃沉淀，收集上清。

14. 将上清吸入另一干净离心管，在 37℃水浴 10 分钟。

15. 在 37℃，1000g 力离心 5 分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为 20-30μl。

【注】:

1)此步骤必须在 37℃条件下离心。

2)没有 37℃离心条件也可以不离心，稍微延长 37℃水浴时间，至液体澄清，分层清晰。

16. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

【注】:

1)上层部分为内质网内非膜蛋白的蛋白。

2)待下游目的膜蛋白实验完成后在丢弃此部分。膜蛋白萃取不wan全时此部分蛋白仍可以进行再次提取膜蛋白。

17. 用 50-100μl 冷的试剂 D 膜蛋白溶解液溶解下层内质网膜蛋白部分，即得内质网膜蛋白。

18. 将内质网膜蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

【注】:

1)建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2)蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

三、组织内质网膜蛋白提取：

1. 提取液制备：

每 200μl 冷的蛋白提取液 C 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

每 200μl 冷的蛋白提取液 D 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】:

1)根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

2)加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3)以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 取 50-100mg 新鲜动物组织样本，用 PBS 洗涤干净；

3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。

4. 加入 500μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。

5. 用 Dounce 匀浆器充分匀浆 30-40 下，至无明显固体团块。然后在 4℃，1000×g 条件下离心 5 分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

7. 在 4℃，11000×g 条件下离心 10 分钟，将上清吸入另一预冷的干净离心管。

8. 在 4℃，30000×g -50000×g 条件下离心 45 分钟。

9. 在沉淀中加入 400μl 冷的试剂 B，混匀。

10. 在 4℃，30000×g -50000×g 条件下离心 45 分钟。

11. 弃上清，沉淀中加入 100-200μl 冷的蛋白提取液 C，混匀。

【注】:

1)提取液 C 使用前必须保持在 2-8℃条件。

12. 在 4℃条件下振荡 30-40 分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。

【注】

1)此步骤必须在 2-8℃处理。

2)用振荡器/摇床的较低转速，保持液体晃动即可。

3)没有 2-8℃振荡条件也可以不振荡，置 2-8℃静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

13. 在 4℃，12000×g 条件下离心 5 分钟。弃沉淀，收集上清。

14. 将上清吸入另一干净离心管，在 37℃水浴 10 分钟。

15. 在 37℃，1000g 力离心 5 分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为 20-30μl。

【注】:

1)此步骤必须在 37℃条件下离心。

2)没有 37℃离心条件也可以不离心，稍微延长 37℃水浴时间，至液体澄清，分层清晰。

16. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

【注】:

1)上层部分为内质网内非膜蛋白的蛋白。

2)待下游目的膜蛋白实验完成后在丢弃此部分。膜蛋白萃取不wan全时此部分蛋白仍可以进行再次提取膜蛋白。

17. 用 50-100μl 冷的试剂 D 膜蛋白溶解液溶解下层内质网膜蛋白部分，即得内质网膜蛋白。

18. 将内质网膜蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

【注】:

1)建议用 BCA法进行蛋白定量。

2)蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

注意事项：

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并che底清除残留清洁剂。

3. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

4. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

5. 如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

内质网膜蛋白提取试剂盒 常备现货

产品订购信息：

P4998  内质网膜蛋白提取试剂盒  50T/100T