核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。
核蛋白提取试剂盒(无去垢剂）常备现货

诺博莱德 核蛋白提取试剂盒（无去垢剂）

核蛋白提取试剂盒(无去垢剂）常备现货

产品货号：P5072

产品名称：核蛋白提取试剂盒（无去垢剂）

产品规格：50T/100T

产品简介：

中文名称：核蛋白提取试剂盒（无去垢剂）

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder P5072 核蛋白提取试剂盒（无去垢剂）

适用样本：动物细胞/组织

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

产品简介：

核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

本试剂盒的所有组份均不含去垢剂成分，最后得到的蛋白样品的成分对 NI 柱纯化、分子筛、离子交换、亲和纯化等下游应用没有去垢剂影响。

本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含 SDS、TritonX-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。

本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于 2D 电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品脱盐后再用于 2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理。

适用样本：细胞、组织。

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））（phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

产品特点：

1. 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2. 将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。

3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5. 蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

6. Western实验内参可以选用Lamin B、TBP、Histon H3。

二、细菌蛋白提取：

1.提取液制备：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物和 1μl 磷酸酶抑制剂。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物和 1μl 磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

【注】：

1) 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。

2) 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3) 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2.取 5-10×10⁶个细胞，在 4℃，500×g 力条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3.用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4.每 20μl 体积细胞沉淀（约 20 mg，2×10⁶个细胞）中加入 200-300μl 冷的提取液 A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置 2-8℃条件振荡 10-30 分钟。

【注】：

1) 提取液 A 处理后细胞体积应减少，否则延长提取液 A 振荡处理时间。

2) 如果需要同时收集胞质蛋白，可以稍微减少试剂 A 的用量，以提高获得的胞质蛋白样品的浓度。

3) 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

4) 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

5.然后在 4℃，2000×g 条件下离心 5 分钟。

6.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

7.在沉淀中加入 80-200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必须尽可能吸干提取液 A。否则会影响核蛋白纯度。

2) 也可以用 PBS 将沉淀洗涤一次。PBS 重悬沉淀，12000g 离心 5 分钟。

3) 提取液 B 用量根据实验细胞数量情况调整，细胞数量多则多加。也可根据预实验时最终蛋白浓度实际情况调整。

8.置 2-8℃条件振荡 30-40 分钟。

【注】：

1) 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

2) 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

3) 此步骤蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的蛋白复合物。不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10 秒间隔 10 秒，超声 3 分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，不必进行超声处理。

如果引入其他外源性蛋白质不影响下游实验的话，也可以加入 DNase 处理。

9.在 4℃，12000×g 条件下离心 10 分钟。

10.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

11.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

1) 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2) 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

三、组织蛋白提取：

1.提取液制备：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物和 1μl 磷酸酶抑制剂。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制剂混合物和 1μl 磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

【注】：

1) 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。

2) 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3) 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2.取适量组织样本用手术jian刀尽可能剪碎，每 20 mg 样本中加入 200-300μl 冷的提取液 A，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。

3.匀浆液置 2-8℃条件振荡 10-30 分钟。

【注】：

1) 提取液 A 处理后细胞体积应减少，否则延长提取液 A 振荡处理时间。

2) 如果需要同时收集胞质蛋白，可以稍微减少试剂 A 的用量，以提高获得的胞质蛋白样品的浓度。

3) 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

4) 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

4. 然后在 4℃，2000×g 力条件下离心 5 分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

6. 在沉淀中加入 80-200μl 冷的蛋白提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必须尽可能吸干提取液 A。否则会影响核蛋白纯度。

2) 也可以用 PBS 将沉淀洗涤一次。PBS 重悬沉淀，12000g 离心 5 分钟。

3) 提取液 B 用量根据实验细胞数量情况调整，细胞数量多则多加。也可根据预实验时最终蛋白浓度实际情况调整。

7. 置 2-8℃条件振荡 30-40 分钟，至无明显沉淀。

【注】：

1) 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

2) 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

3) 此步骤蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物

为含有基因组 DNA 等的蛋白复合物。不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10 秒间隔 10 秒，超声 3 分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，不必进行超声处理。

如果引入其他外源性蛋白质不影响下游实验的话，也可以加入 DNase 处理。

8. 在 4℃，12000×g 条件下离心 10 分钟。

9. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

1) 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2) 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

注意事项：

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并che底清除残留清洁剂。

3. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

4. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

5. 如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

核蛋白提取试剂盒(无去垢剂）常备现货

产品订购信息：

P5072  核蛋白提取试剂盒（无去垢剂）  50T/100T