该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5′-磷酸末端和 3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。
T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase 核酸检测

诺博莱德  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase

T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase   核酸检测

产品货号：T9298

产品名称：T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase

英文名称：T4 DNA ligase

产品别名：T4 DNA连接试剂盒

产品规格：60U

产品简介：

储存条件：Store at -20℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderT9298  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase特性：

高效连接粘性末端和平末端

T/A 克隆

dsDNA 切刻修复

构建高丰度克隆文库

RNA 和 DNA 的连接

概述：

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5′-磷酸末端和 3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源：

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件：

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推荐 DNA 5′ 末端浓度为 0.1-1.0 μM，16℃ 温育。

热失活：65℃ 10 分钟。

单位定义（粘性末端活性单位）：

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃ 反应条件下，30 分钟能使 50% 的经 HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5′ 端浓度为 0.12 μM（300 μg/ml）] 连接所需的酶量。

注意事项：

与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应于 -20℃、50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）中保存。如稀释后马上使用，也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。

使用示例：

1、先将 10×T4DNALigaseBuffer 在冰上融化，并进行短暂的离心。

2、以 20μL 连接体系示例，在无菌微量离心管中加入以下各种成分：

【注】：平末端载体与DNA片段进行连接时，应先将载体进行去磷酸化处理，以防发生自连接现象。为提高连接效率，每20µL反应体系中可以加2µL50%PEG4000。

3、16℃连接过夜。

4、转化实验

1）将连接产物加入到100µL 感受态细胞中（连接产物不应超过感受态细胞的1/10），轻弹混匀，冰上孵育30min。

2）将离心管于42℃，热激90sec（不要晃动），之后立刻置于冰水浴静置2-3min。

3）向离心管中加入900µLLB或SOC培养基，37℃，150rpm，振荡培养45min，该过程使菌体复苏，抗性基因表达。

4）2500 g 离心5min，吸去900µL上清，用剩余培养基重悬菌体，用无菌涂布棒将剩余菌体在正确抗性的平板上涂布均匀，待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率＞108cfu/µg），可直接吸取100-200µL37℃孵育后的菌液涂板，剩余菌液可在4℃保存，1周内均可重新涂板。

注意事项：

1、10×T4DNALigaseBuffer 中含有 ATP，为避免 ATP 的降解，建议解冻后分装冻存于-20℃。

10×T4 DNA Ligase Buffer 在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2、平末端的载体与 DNA 片段连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。

注意：如果向反应体系中加入 PEG 可以促进平末端的连接，但 PEG 可能导致cDNA 片段克隆产物 出现串联体并抑制包装的反应。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4、本产品仅作科研用途！

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产品订购信息

T9298  T4 DNA 连接酶 T4 DNA ligase  60U