诺博莱德 通用基因组DNA提qu试剂盒
通用基因组DNA提qu试剂盒 质粒提取
产品货号:D0988
产品名称:通用基因组DNA提qu试剂盒 Universal Genomic DNA Extraction Kit
英文名称:Universal Genomic DNA Extraction Kit
产品规格:50T/100T
产品简介:
储存条件:酶附件-20℃,其它试剂RT,复检期1年
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyderD0988 通用基因组DNA提qu试剂盒本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。
操作步骤(仅供参考):
* 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签(每瓶需单独加入 45mL 无水乙醇)。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品处理:
1)土壤:称取0.1-0.3 g (根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末,加500 μL溶液A,振荡至che底悬浮。
2)粪便:称取0.1-0.3 g (根据干湿) 粪便,加500 μL溶液A,振荡至che底悬浮。
3)昆虫:称取0.1-0.3 g 昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500 μL溶液A,振荡至che底悬浮。
4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3 g(根据干湿)加500 μL溶液A,如为块状,可0.1-0.3 g 用液氮研磨成粉未,再加500 μL溶液A,振荡至che底悬浮。
2、向悬浮液中加入2 μL RNase A,55℃放置10 min。
3、加入20 μL的蛋bai酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30 min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10 min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。
4、加入500 μL溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5 min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不che底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。
5、加入500 μL无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置2 min (分两次加入,每次700 μL)。
6、12000 rpm 离心2 min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600 μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1 min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入600 μL漂洗液,12000 rpm离心1 min,弃废液,将吸附柱放入收集管中
9、12000 rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200 μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5 min,12000 rpm离心2 min。
11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2 min,12000 rpm离心2 min,即可得到高质量的基因组DNA。
注意事项:
1、由于样品不同,最终提取的DNA含量和纯度也有所不同,一般来说,如果所提取DNA用电泳的方法检测不到,PCR会有结果,样品尽可能的新鲜。否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。
3、如果样品消化不che底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。
4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50 μL,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
5、DNA 浓度及纯度检测(浓度较高时):得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260值为 1 相当于大约 50 μg/ mL 双链 DNA、40 μg/ mL 单链 DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
通用基因组DNA提qu试剂盒 质粒提取
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D0988 通用基因组DNA提qu试剂盒 Universal Genomic DNA Extraction Kit 50T/100T
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