细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白，提取的膜蛋白纯度高，不含核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的膜蛋白保持天然活性，而且绝少交叉污染。本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
细胞膜蛋白提取试剂盒 常备现货

细胞膜蛋白提取试剂盒 常备现货

NobleRyder  EX9388 细胞膜蛋白提取试剂盒

产品货号：EX9388

产品名称：细胞膜蛋白提取试剂盒

产品规格：50T / 100T

产品简介：

中文名称：细胞膜蛋白提取试剂盒

规格：50T ; 100T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder  EX9388 细胞膜蛋白提取试剂盒产品介绍：

细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白，提取的膜蛋白纯度高，不含核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的膜蛋白保持天然活性，而且绝少交叉污染。本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。本试剂盒提取的膜蛋白为细胞的总膜蛋白，需要单独的细胞器膜蛋白提取，请选用其他货号的试剂盒。

适用样本：动物细胞

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、涡旋混匀器、匀浆机/匀浆器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

产品特点：

1、使用方便，从细胞、组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2、提取过程简单方便。

3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5、蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种 独立的蛋白酶抑制剂 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事项：

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于 低温。

3、蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4、可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

5、Western Blot 实验内参可以选用Na-K ATPase。

6、提取液A 在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

7、膜蛋白电泳时loading buffer 应该避免煮沸。

8、膜蛋白电泳时可以提高loading buffer 的SDS含量。

二、操作步骤

1. 提取液制备：

 每200 μl 蛋白提取液A 中分别加入2 μl 蛋白提取液B 和2 μl 蛋白酶抑制剂混合物， 混匀后置冰上备用。

【注】：

l  根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

l  加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

l  提取液A 在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

l  以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 取5-10×10 6个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

【注】：

l  细胞数量根据实验情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。

l  在条件允许的情况下，尽可能加大细胞上样量。

3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 在细胞沉淀中加入200-400μl冷的提取液A，高速涡旋振荡5秒，置2-8℃条件振荡30分钟-1 小时。

【注】：

l  必须2-8℃低温振荡。

l  用振荡器/摇床的较低转速，保持液体能轻微晃动即可。

l  没有低温振荡条件可以不振荡，置2-8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

l  提取液A 处理后细胞沉淀应明显减少，否则延长处理时间。

5. 然后在4℃，12000×g 条件下离心5 分钟，收集上清，弃沉淀。

6. 将上清吸入另一干净离心管，置 37℃水浴 10 分钟。然后在 37℃，500×g力离心2分钟。

【注】：

l  必须37℃水浴和离心。

l  没有37℃离心条件可以不离心，延长水浴时间至液体澄清分层明显即可。

7. 此时溶液分为两层，小心移除上层，留下管底部下层大约20-50 μl 液体。

【注】：

l  下层为粘稠状液体。

8. 用30-100 μl 膜蛋白溶解液C 溶解该液体，即得膜蛋白样品。

【注】：

l  膜蛋白比较难溶解，不能很快溶解混匀，可以在加入溶解液后稍微吹打混匀，然后置于4℃ 冰箱静置至溶解。中途用移液器轻轻吹打混匀一次。静置后取出再次用移液器稍微吹 打混匀即可。

l  于4℃静置直至管底透明胶状物wan全溶解。

9. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

l  建议用BCA 法进行蛋白定量。

l  蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

细胞膜蛋白提取试剂盒 常备现货

产品订购信息：

NobleRyder  EX9388 细胞膜蛋白提取试剂盒 50T / 100T