跨膜蛋白承担各种生物功能，膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
酵母膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒，酵母膜蛋白提取试剂盒可以从各种酵母样本中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。
酵母质膜蛋白提取试剂盒 常备现货

诺博莱德 酵母质膜蛋白提取试剂盒

酵母质膜蛋白提取试剂盒 常备现货

产品货号：P4968

产品名称：酵母质膜蛋白提取试剂盒

产品规格：50T/100T

产品简介：

中文名称：酵母质膜蛋白提取试剂盒

规格：100T ; 50T

储存条件：2-8℃，1 year

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder P4968 酵母质膜蛋白提取试剂盒

产品简介：

跨膜蛋白承担各种生物功能，膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。

酵母膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒，酵母膜蛋白提取试剂盒可以从各种酵母样本中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。

本试剂盒含有的du特配方能够有效溶解酵母总膜组份，包括质膜、核膜和各种细胞器膜。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

适用样本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以 2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2. 蛋白酶抑制剂在 2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 试剂拆封后请尽快使用完！

自备试剂和仪器：

离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 缓冲液、蛋白定量试剂盒，离心管、吸头、一次性手套

产品特点：

1、提取过程简单方便。

2、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

7. 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

二、酵母质膜蛋白提取：

1. 提取液制备：

每 500ul 蛋白提取液 B 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】：

1) 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

3) 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2. 取适量酵母培养物，在 4℃，2000×g 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用冷 PBS 洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每 100-200ul 体积酵母沉淀物中加入 500ul 酵母质膜蛋白提取液 A，混匀后，在室温或 37℃条件下轻轻振荡 30 分钟-1 小时。

【注】：

1) 若后面步骤中试剂 B 处理时沉淀难以裂解，应延长此步试剂 A 的处理时间。

2) 有些酵母样本细胞壁较厚，难以破壁，可以将试剂 A 处理时间延长，最长可以将试剂 A 处理时间延长至 8 小时。

5. 在 4℃，2000g 条件下离心 5-10 分钟，移除上清，收集沉淀。

6. 在沉淀物中加入 500ul 冷的（4℃）酵母质膜蛋白提取液 B，混匀。

7. 在 2-8℃条件下轻轻振荡 15-45 分钟。

【注】：

1) 必须在 2-8℃条件下处理。

2) 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

3) 没有 2-8℃振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

4) 试剂 B 处理后沉淀应减少，否则延长处理时间。

5) 若延长时间后沉淀仍难以裂解，应延长试剂 A 的处理时间。

8. 将提取液在 4℃条件下 12000×g 离心 5 分钟，取上清。

【注】：

1) 此时酵母膜蛋白已溶解于抽提液 B，酵母菌体沉淀会减少，若有大量未溶解酵母菌体，请延

长步骤 4 和步骤 7 的振荡时间，振荡中途可用移液器吹打混匀。

9. 将上清在 37℃水浴 10 分钟。

10. 在 37℃，1000×g 条件下离心 3 分钟。

【注】：

1) 此步骤必须在 37℃离心。

2) 无 37℃条件离心也可不离心，延长 37℃水浴时间至液体澄清，分层明显即可。

11. 此时溶液分为 2 层，小心移除上层部分，留下管底部下层部分大约 30-50ul 液体。

【注】：

1) 下层为粘稠状液体。

12. 用 50-100ul 膜蛋白溶解液 C 溶解该下层溶液，即得酵母质膜蛋白样品。

【注】：

1) 膜蛋白如果不能很快溶解混匀，可以在加入溶解液后稍微吹打混匀，然后置于 4℃冰箱静置10 分钟。静置后取出再次用移液器稍微吹打混匀即可。

2) 如果 4℃静置 10 分钟后仍未有效混匀，可以稍微延长静置时间。

13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

1) 建议用 BCA 法进行蛋白定量。

2) 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得优良实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并che底清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

酵母质膜蛋白提取试剂盒 常备现货

产品订购信息：

P4968  酵母质膜蛋白提取试剂盒  50T/100T